產(chǎn)品中心
產(chǎn)品詳情

  • 產(chǎn)品名稱： HotStart Taq Plus DNA Polymerase(含預(yù)混Mg2+的10×Taq Plus Buffer)

  • 產(chǎn)品型號(hào)： 500 U,2.5 U/ul
  • 產(chǎn)品廠商：通蔚生物
  • 產(chǎn)品價(jià)格：897
  • 產(chǎn)品庫(kù)存：113
  • 產(chǎn)品文檔：
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簡(jiǎn)單介紹：
HotStart Taq Plus DNA Polymerase(含預(yù)混Mg2+的10×Taq Plus Buffer)Taq Plus DNA Polymerase 是從克隆有 Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大腸桿菌經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)后分離純化的，其分子量為 94 KD，經(jīng)與 Pfu 按一定比例混合而成，該酶可增強(qiáng)擴(kuò)增的保真性，大大增強(qiáng)擴(kuò)增的特異性和擴(kuò)增效率。Hotstart Taq Plus DNAPolymerase 是抗體修飾熱啟動(dòng)酶，具有 5’-3’DNA 聚合酶活性和5’-3’外切核酸酶活性，無3’-5’外切酶活性。在 PCR 中，該酶延伸速度為 2-3kb/min，產(chǎn)物3’端帶A，可直接用TA載體克隆。一般用于 DNA 片段的 PCR 擴(kuò)增、DNA 標(biāo)記、引物延伸、序列測(cè)定等.
詳情介紹：
Taq Plus DNA Polymerase 是從克隆有 Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大腸桿菌經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)后分離純化的，其分子量為 94 KD，經(jīng)與 Pfu 按一定比例混合而成，該酶可增強(qiáng)擴(kuò)增的保真性，大大增強(qiáng)擴(kuò)增的特異性和擴(kuò)增效率。Hotstart Taq Plus DNAPolymerase 是抗體修飾熱啟動(dòng)酶，具有 5’-3’DNA 聚合酶活性和5’-3’外切核酸酶活性，無3’-5’外切酶活性。在 PCR 中，該酶延伸速度為 2-3kb/min，產(chǎn)物3’端帶A，可直接用TA載體克隆。一般用于 DNA 片段的 PCR 擴(kuò)增、DNA 標(biāo)記、引物延伸、序列測(cè)定等。

成分規(guī)格

產(chǎn)品組成

規(guī)格

HotStart Taq DNA polymerase

250Ｕ/ 2.5U/μl

10 × Taq Plus Buffer（含 Mg2+）

1m / 2*1 ml

-20℃，有效期 1 年

本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于其它用途


使用方法
（注 意：以下舉例為常規(guī)PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件，實(shí)際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整和優(yōu)化）
1. PCR 體系：
推薦體系（50μl）

試劑

用量

模板 DNA

< 1μg

10 × Taq Buffer

5μl

dNTP Mixture(2.5 mM each)

4μl

Primer 1 (10 μM)

2μl

Primer 2 (10 μM)

2μl

Hotstart t Taq Plus DNA Polymerase (2.5 U/μl)

0.5 ~ 1μl

ddH2O

Up to 50μl


注 意：
A 引物濃度請(qǐng)以終濃度 0.1-1.0μM 作為設(shè)定范圍的參考。擴(kuò)增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系。
B 鎂離子濃度請(qǐng)以終濃度 1.5-3mM 作為設(shè)定范圍的參考?？筛鶕?jù)不同的引物對(duì)和模板來調(diào)節(jié)鎂離子濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系）
2. PCR 程序

過程

溫度

時(shí)間

預(yù)變性

94℃

5min

25－35cycles

變性

94℃

30sec

退火

55－65℃

30sec

延伸

72℃

1kb/30sec

終延伸

72℃

5min


注 意：
A 一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引物的熔解溫度 Tm 低 5℃，無法得到理想的擴(kuò)增效率時(shí)，適當(dāng)降低退火溫度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，提高退火溫度，由此優(yōu)化反應(yīng)條件。
b 延伸時(shí)間應(yīng)根據(jù)所擴(kuò)增片段大小設(shè)定，Hotstart Taq Plus DNA Polymerase 的擴(kuò)增效率為 1 kb/20-30 sec。
C 可根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的下游應(yīng)用設(shè)定循環(huán)數(shù)。如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，錯(cuò)配機(jī)率會(huì)增加，非特異性背景嚴(yán)重。所以，在保證產(chǎn)物得率的前提下，應(yīng)盡量減少循環(huán)次數(shù)）
3. 結(jié)果檢測(cè)：
反應(yīng)結(jié)束后取 5 μl 反應(yīng)產(chǎn)物，加入適量上樣緩沖液后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。
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